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¿Cómo se podría identificar las proteínas desconocidas del punto de control del ciclo celular (es decir, ciclinas)?

¿Cómo se podría identificar las proteínas desconocidas del punto de control del ciclo celular (es decir, ciclinas)?


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No, esto no es "tarea". Soy un estudiante de doctorado, y esto fue algo que se mencionó al final de un club de revistas recientemente, y uno de los IP planteó esta pregunta y nos dijo que lo pensáramos. Suena simple, pero me tiene desconcertado.

  • Western blot: No. Necesitamos un antígeno conocido y, como no sabemos lo que buscamos, esto no funcionará.

  • Gel de proteína total: Recolecte lisados ​​celulares de diferentes poblaciones de células que se encuentran en diferentes partes del ciclo celular, ejecútelo en un gel y observe cualquier expresión cíclica. Esto parece bastante bien, pero siento que hay algunos problemas: 1) identificar las poblaciones de células que se encuentran en las diferentes etapas del ciclo; 2) otras proteínas de tamaño igual o similar que no se pueden diferenciar.

  • Algún tipo de ARNi, caída, etc .: Al igual que la mancha occidental, no sabemos con qué nos enfrentamos y, por lo tanto, no podemos apuntar a nada.

  • Ensayo pulldown con especificación de masas: No sé mucho al respecto, aparte de que analiza las interacciones proteína-proteína. No estoy seguro de si sería apropiado aquí.

En cuanto al modelo, estaba pensando en levadura o en alguna línea celular de mamífero inmortalizada.


De hecho, he estado involucrado en una búsqueda de proteínas de puntos de control en diatomeas (un tipo de algas eucariotas), la familia de las ciclinas se ha expandido enormemente en estos organismos y estábamos tratando de averiguar qué detectaban / señalizaban estas ciclinas adicionales [1].

En pocas palabras, el primer autor analizó diferentes condiciones que probablemente afectarían la expresión de ciclina. La mayoría de estas condiciones impidieron la división celular (por ejemplo, falta de nutrientes, inhibidores químicos G2 / M o luz) y se tomaron muestras antes y después de eliminar las condiciones de bloqueo. Posteriormente, se cuantificaron los ARNm de los genes sospechosos del ciclo celular. Como los ciclos de ARNm y proteínas de los genes del punto de control son extremadamente transitorios, esto requirió algo de esfuerzo. Las ciclinas que reaccionaron a las condiciones se caracterizaron mediante ensayos de complementación y otras técnicas.

Posteriormente se utilizaron dos ensayos híbridos de levadura para identificar las proteínas que interactúan para construir la red [2]. En general, estos experimentos no fueron tan sencillos y jugar con genes esenciales causa muchos problemas, pero aún no es nada comparado con el trabajo de ciclina de levadura original en el que estaban atravesando montañas de mutantes sensibles a la temperatura defectuosos en su ciclo celular (ver el trabajo de Lee Hartwell y Paul Nurse, quienes obtuvieron el premio Nobel por esto en 2001 con Tim Hunt).


Ver el vídeo: Control del ciclo celular. Khan Academy en Español (Enero 2023).