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¿Es seguro usar una incubadora de huevos para cultivar cultivos bacterianos?


He estado usando una pequeña incubadora de huevos para cultivar bacterias ambientales en placas de Petri. Siempre uso guantes y anteojos cuando manipulo los platos y hago la tinción de Gram. ¿Qué posibilidades hay de que las bacterias que crecen en el plato se propaguen por el aire cuando abro la incubadora o los platos?


Una buena práctica para minimizar la contaminación de una placa de Petri y del entorno externo es sin quitar nunca la tapa por completo de la placa de Petri: para acceder al contenido de la placa de Petri con un bucle de inoculación, levante la tapa de un lado, lentamente: lo suficientemente alto para que el bucle de inoculación entre, tome parte del contenido y salga.


si mantiene las placas de Petri tapadas, habrá poca o ninguna contaminación y habrá un aerosol de e coli insignificante cuando abra la incubadora. como lo menciona @MartinKivana, no abra las placas, especialmente cerca de la incubadora. En un ambiente estéril es mejor ...

si no mantienes las placas de Petri tapadas, tu experimento se arruinará.

puedes limpiarlo con lejía de vez en cuando ...

para que lo cubra.


Transformación bacteriana

La transformación es el proceso mediante el cual se introduce ADN extraño en una célula. La transformación de bacterias con plásmidos es importante no solo para estudios en bacterias, sino también porque las bacterias se utilizan como medio para almacenar y replicar plásmidos. Debido a esto, casi todos los plásmidos (incluso los diseñados para la expresión de células de mamíferos) portan tanto un origen de replicación bacteriano como un gen de resistencia a antibióticos para su uso como marcador seleccionable en bacterias.

Los científicos han realizado muchas modificaciones genéticas para crear cepas bacterianas que se pueden transformar más fácilmente y que ayudarán a mantener el plásmido sin reorganizar el ADN del plásmido. Además, se han descubierto tratamientos específicos que aumentan la eficiencia de la transformación y hacen que las bacterias sean más susceptibles a la transformación química o eléctrica, generando lo que comúnmente se conoce como "células competentes".

Muchas empresas venden células competentes, que vienen congeladas y preparadas para lograr eficiencias de transformación óptimas al descongelarse. Para obtener la mayor eficiencia de transformación, le recomendamos que siga las instrucciones que vienen con sus células competentes.

Última actualización: 13 de noviembre de 2017

Mire el video del protocolo a continuación para aprender cómo aislar colonias bacterianas individuales.

  • Incubadora con agitación a 37 ° C
  • Incubadora estacionaria a 37 ° C
  • Baño de agua a 42 ° C
  • Cubo de hielo lleno de hielo
  • Tubos de microcentrífuga
  • Dispositivo de esparcimiento estéril
  • Placa de agar LB (con el antibiótico apropiado)
  • Medios LB o SOC
  • Células competentes
  • ADN que te gustaría transformar

Contaminación del cultivo celular

La contaminación biológica es el temor de todas las personas que trabajan con cultivos celulares. Cuando los cultivos se infectan con microorganismos o se contaminan de forma cruzada con células extrañas, estos cultivos generalmente deben destruirse. Dado que las fuentes de contaminación de los cultivos son ubicuas y difíciles de identificar y eliminar, ningún laboratorio de cultivo celular se ve afectado por esta preocupación. Con el continuo aumento del uso del cultivo celular para la investigación biológica, la producción de vacunas y la producción de proteínas terapéuticas para la medicina personalizada y las aplicaciones emergentes de la medicina regenerativa, la contaminación del cultivo sigue siendo un tema de gran importancia.

Introducción

El cultivo celular continúa una tendencia de 60 años de uso e importancia cada vez mayores en la investigación académica, la medicina terapéutica y el descubrimiento de fármacos, acompañado de un impacto económico amplificado. 1,2 Las nuevas terapias, vacunas y medicamentos, así como órganos regenerados y sintéticos, provendrán cada vez más de células cultivadas de mamíferos. Con un mayor uso y competencia de las técnicas de cultivo celular, se obtiene una mejor comprensión de los peligros y problemas asociados con la contaminación del cultivo celular. En el siglo XXI, existen mejores métodos de prueba y herramientas preventivas, y la conciencia del riesgo y los efectos de la contaminación requiere que los cultivadores de células permanezcan atentos sin ser detectados. La contaminación puede tener efectos secundarios generalizados.

Contaminación biológica: un compañero común

El descubrimiento casual de la penicilina en 1928 fue uno de esos raros sucesos con los que la mayoría de los investigadores solo pueden soñar. Después de regresar de unas vacaciones de verano durante las cuales dejó descuidadamente un juego de placas de Petri apiladas en un rincón de su laboratorio, Alexander Fleming descubrió una de las drogas más poderosas del siglo XX. Fleming notó que uno de sus cultivos bacterianos estaba contaminado con un hongo, pero las colonias de estafilococos que rodeaban al hongo habían sido destruidas. El hongo era, por supuesto, Penicillium notatum, y Fleming descubrió antibióticos. Sin embargo, este es un ejemplo muy raro de contaminación que realmente avanza en el camino de la investigación científica. En su mayor parte, la contaminación de las culturas sigue siendo la peor pesadilla de todos los científicos. Carolyn Kay Lincoln y Michael Gabridge resumieron el problema en 1998: & ldquoLa contaminación de cultivos celulares sigue siendo un problema importante en el banco de investigación básica, así como para los fabricantes de bioproductos. La contaminación es lo que realmente pone en peligro el uso de cultivos celulares como reactivos y herramientas confiables. & Rdquo 3

La contaminación biológica de cultivos de células de mamíferos es más común de lo que parece. Las estadísticas informadas a mediados de la década de 1990 muestran que entre el 11 y el 15 por ciento de los cultivos en los laboratorios de EE. UU. Estaban infectados con especies de Mycoplasma. 4 Incluso con un mejor reconocimiento del problema y pruebas más estrictas de los reactivos y medios preparados comercialmente, la incidencia de crecimiento de micoplasmas en cultivos de laboratorio de investigación fue del 23 por ciento en un estudio reciente, 5 y en 2010 un asombroso 8,45 por ciento de cultivos probados comercialmente a partir de productos biofarmacéuticos. las fuentes estaban contaminadas con hongos y bacterias, incluido el micoplasma. 6

En el laboratorio de investigación, la contaminación no es solo una irritación ocasional, sino que puede costar recursos valiosos, como tiempo y dinero. En última instancia, la contaminación puede afectar la credibilidad de un grupo de investigación o las publicaciones científicas en particular a veces deben retirarse debido a los temores sobre la contaminación de muestras retrospectivas o los resultados reportados que resultan ser artefactos. En la fabricación de productos biofarmacéuticos, la contaminación puede tener un efecto aún más dramático cuando se deben desechar las series de producción completas. Por lo tanto, es extremadamente importante comprender cómo puede ocurrir la contaminación de la muestra y qué métodos están disponibles para limitarla y, en última instancia, prevenirla.

¿Qué causa la contaminación biológica?

Los contaminantes biológicos se pueden dividir en dos subgrupos dependiendo de la facilidad para detectarlos en cultivos, siendo los más fáciles la mayoría de las bacterias y hongos. Aquellos que son más difíciles de detectar y, por lo tanto, presentan problemas potencialmente más serios, incluyen Mycoplasmas, virus y contaminación cruzada por otras células de mamíferos.

Bacterias y hongos

Las bacterias y los hongos, incluidos los mohos y las levaduras, son omnipresentes en el medio ambiente y pueden colonizar y florecer rápidamente en el rico medio de cultivo celular. Su pequeño tamaño y su rápido crecimiento hacen que estos microbios sean los contaminantes de cultivos celulares que se encuentran con mayor frecuencia. En ausencia de antibióticos, las bacterias generalmente se pueden detectar en un cultivo a los pocos días de la contaminación, ya sea por observación microscópica o por sus efectos directos sobre el cultivo (cambios de pH, turbidez y muerte celular). Las levaduras generalmente hacen que el medio de crecimiento se vuelva muy turbio o turbio, mientras que los mohos producirán micelio ramificado, que eventualmente aparecerá como grumos peludos flotando en el medio.

Micoplasmas

Micoplasmas son sin duda los más graves y extendidos de todos los contaminantes biológicos, debido a sus bajas tasas de detección y su efecto sobre las células de los mamíferos. Aunque los micoplasmas son técnicamente bacterias, poseen ciertas características que los hacen únicos. Son mucho más pequeñas que la mayoría de las bacterias (0,15 a 0,3 & mum), por lo que pueden crecer a densidades muy altas sin ningún signo visible. También carecen de una pared celular y eso, combinado con su pequeño tamaño, significa que a veces pueden deslizarse a través de los poros de las membranas de los filtros que se utilizan en la esterilización. Dado que los antibióticos más comunes se dirigen a las paredes celulares bacterianas, micoplasmas son resistentes.

Micoplasmas son extremadamente perjudiciales para cualquier cultivo celular: afectan el metabolismo y la morfología de las células huésped y rsquo, causan aberraciones y daños cromosómicos y pueden provocar respuestas citopáticas, lo que hace que los datos de cultivos contaminados no sean fiables. En Europa, micoplasma Se ha descubierto que los niveles de contaminación son extremadamente altos, entre el 25 y el 40 por ciento, y las tasas informadas en Japón han llegado al 80 por ciento.4 La discrepancia entre los EE. UU. y el resto del mundo probablemente se deba al uso de programas de pruebas. Las estadísticas muestran que los laboratorios que realizan pruebas micoplasma La contaminación tiene una incidencia mucho menor una vez detectada, la contaminación se puede contener y eliminar. Prueba para micoplasma debe realizarse al menos una vez al mes, y existe una amplia gama de kits disponibles comercialmente. La única forma de garantizar la detección de especies es utilizar al menos dos métodos de prueba diferentes, como la tinción DAPI y la PCR. 5

Igual que micoplasmas, los virus no proporcionan señales visuales de su presencia, no cambian el pH del medio de cultivo ni producen turbidez. Dado que los virus usan a su huésped para la replicación, los medicamentos que se usan para bloquear los virus también pueden ser altamente tóxicos para las células que se cultivan. Sin embargo, los virus que causan daño a la célula huésped tienden a ser autolimitados, por lo que la principal preocupación por la contaminación viral es su potencial de infectar al personal de laboratorio. Aquellos que trabajan con células humanas o de otros primates deben tomar precauciones de seguridad adicionales.

Otros tipos de células de mamíferos

La contaminación cruzada de un cultivo celular con otros tipos de células es un problema grave que solo recientemente se ha considerado alarmante. 7,8 Se estima que entre el 15 y el 20 por ciento de las líneas celulares actualmente en uso están mal identificadas 9,10, un problema que comenzó con la primera línea celular humana, HeLa, un adenocarcinoma cervical inusualmente agresivo aislado de Henrietta Lacks en 1952. Las células HeLa son tan agresivos que, una vez introducidos accidentalmente en un cultivo, rápidamente crecen en exceso las células originales. Pero el problema no se limita a HeLa, hay muchos ejemplos de líneas celulares que se caracterizan como células endoteliales o células de cáncer de próstata, pero en realidad son células de cáncer de vejiga y se caracterizan como células de cáncer de mama, pero en realidad son células de cáncer de ovario. En estos casos, el problema se produce cuando el tipo de célula extraña se adapta mejor a las condiciones de cultivo y, por tanto, sustituye a las células originales en el cultivo. Esta contaminación plantea claramente un problema para la calidad de la investigación producida, y el uso de cultivos que contienen los tipos de células incorrectos puede provocar la retractación de los resultados publicados.

Fuentes de contaminantes biológicos en el laboratorio

Para reducir la frecuencia de la contaminación biológica, es importante comprender cómo los contaminantes biológicos pueden ingresar a las placas de cultivo. En la mayoría de los laboratorios, las mayores fuentes de microbios son las que acompañan al personal de laboratorio. Estos se hacen circular como partículas y aerosoles en el aire durante el trabajo normal de laboratorio. Hablar, estornudar y toser pueden generar cantidades significativas de aerosoles. La ropa también puede albergar y transportar una variedad de microorganismos desde fuera del laboratorio, por lo que es crucial usar batas de laboratorio cuando se trabaja en el laboratorio de cultivo celular. Incluso el simple hecho de moverse por el laboratorio puede crear movimiento de aire, por lo que la habitación debe limpiarse con frecuencia para reducir las partículas de polvo.

Ciertos equipos de laboratorio, como dispositivos de pipeteo, agitadores vórtex o centrifugadoras sin recipientes de biocontención, pueden generar grandes cantidades de partículas y aerosoles cargados de microbios. Los equipos de laboratorio de uso frecuente, incluidos baños de agua, refrigeradores, microscopios y cámaras frigoríficas, también son depósitos de microbios y hongos. Las incubadoras mal limpiadas y mantenidas pueden servir como un hogar aceptable para hongos y bacterias. El hacinamiento de materiales en el autoclave durante la esterilización también puede resultar en una eliminación incompleta de microbios.

Los medios de cultivo, sueros bovinos, reactivos y material de plástico también pueden ser fuentes importantes de contaminantes biológicos. Si bien los métodos de prueba comerciales han mejorado mucho con respecto a los de décadas anteriores, es fundamental utilizar materiales que estén certificados para su uso en cultivos celulares. La contaminación cruzada puede ocurrir cuando se trabaja con múltiples líneas celulares al mismo tiempo. Cada tipo de célula debe tener sus propias soluciones y suministros y debe manipularse por separado de otras células. El uso involuntario de suministros, medios o soluciones no estériles durante los procedimientos de cultivo celular de rutina es la principal fuente de propagación microbiana.

La contaminación es un problema frecuente en el cultivo de células y es fundamental que cualquier riesgo se gestione de forma eficaz para que se mantenga la integridad del experimento. Los antibióticos se pueden usar durante algunas semanas para asegurar la resolución de una contaminación microbiana conocida; sin embargo, se debe evitar el uso rutinario. La inclusión regular de antibióticos no solo selecciona organismos resistentes, sino que también enmascara cualquier infección de bajo nivel y errores habituales en la técnica aséptica.

El mejor enfoque para combatir la contaminación es que cada persona lleve registros de todo el trabajo de cultivo celular, incluido cada paso, el aspecto general de las células y las manipulaciones, incluida la alimentación, la división y el recuento de células. Si se produce contaminación, anote las características, la hora y la fecha. De esta manera, se puede identificar cualquier contaminación en el momento en que ocurre y se pueden realizar mejoras en las técnicas asépticas o los protocolos de laboratorio. En el siguiente artículo de esta serie, exploramos con más detalle las medidas efectivas para la prevención de la contaminación, en particular el papel clave del CO2 incubadora.


Crecimiento selectivo

Otra razón para incubar a diferentes temperaturas es promover el crecimiento de un grupo objetivo de bacterias. Por ejemplo, aunque tanto los patógenos como las bacterias ambientales que se encuentran en el interior son mesófilos, los patógenos crecerán más rápido que las cepas ambientales a 37 grados Celsius (98 grados Fahrenheit), la temperatura del cuerpo humano. Lo contrario es cierto a 25 C (77 F), la temperatura de la mayoría de los edificios. Dado que los laboratorios de enseñanza para estudiantes a menudo desean prevenir el crecimiento de patógenos, los cultivos a menudo se incuban a 25 C (77 F).


Incubadoras microbiológicas

La incubación exitosa es un paso esencial en sus flujos de trabajo diarios. Las incubadoras microbiológicas y refrigeradas Thermo Scientific están diseñadas teniendo en cuenta sus muestras para producir resultados fiables.

Para navegar por nuestro portafolio completo o dejar que uno de nuestros expertos lo ayude a hacer una selección.

Incubadoras microbiológicas Heratherm

Incubadoras refrigeradas Heratherm

Incubadora refrigerada de precisión a baja temperatura *

Las incubadoras para estudios microbiológicos están disponibles con diferentes tecnologías, para abordar las temperaturas de incubación específicas que se necesitan para la aplicación.

Incubadoras microbiológicas, también llamadas incubadoras de "solo calor" o "estándar" tienen elementos calefactores y pueden proporcionar temperaturas de incubación que están solo por encima de la temperatura ambiente. Si el laboratorio tiene una temperatura ambiente de aproximadamente 22 ° C, solo pueden abordar temperaturas de incubación superiores a aproximadamente 27 ° C o incluso 30 ° C.

Incubadoras refrigeradas, también llamadas incubadoras de "enfriamiento" tienen enfriamiento y calefacción, y pueden proporcionar un rango de temperatura más amplio, ofreciendo también temperaturas cercanas a la ambiente o incluso por debajo de la temperatura ambiente. Por lo general, también cubren el rango de temperatura de incubación por encima de la ambiente, como lo hacen las incubadoras "microbiológicas" o "solo de calor". Debido a la tecnología más compleja utilizada, una incubadora refrigerada es una inversión más alta.


¿Cuáles son las pautas para el cultivo de camarones en salmuera?

Los beneficios de alimentar con artemia viva son bien conocidos y aceptados en la comunidad de acuarios. Alternativamente, existen muchas dietas inertes, artificiales, convenientes y bien formuladas, que pretenden eliminar por completo la necesidad de tal alimento vivo. Estas dietas preparadas y, lo que es más importante, los aminoácidos, lípidos y vitaminas específicos que contienen son, si no reemplazos completos del alimento vivo, a menudo adiciones necesarias a una dieta de una sola especie que carece de uno o más de los nutrientes esenciales.

Habiendo dicho eso, rara vez una partícula empapada e inanimada de almidón gelatinizado y harina de pescado seca enciende la respuesta de alimentación en los peces como las payasadas de natación de un camarón de salmuera vivo. Por esta razón, los camarones de salmuera vivos siempre serán una parte integral de la solución para mantener poblaciones saludables de acuarios.

Además de moverse por la columna de agua, los camarones de salmuera vivos tienen otras características útiles, a saber:

  • Son suaves y fáciles de digerir y contienen enzimas que ayudan a los peces a utilizar mejor otros alimentos.
  • Tienen un alto contenido de proteínas, que van del 55% al ​​60% de proteína por peso seco, lo que favorece un rápido aumento de peso en los peces jóvenes.
  • Pueden enriquecerse con otros alimentos o aditivos, un proceso que a menudo se denomina "bioencapsulación" para administrar HUFA, antibióticos u otros nutrientes a las especies de destino (consulte SELCO).
  • Se pueden alimentar tanto a peces marinos como de agua dulce, sobreviviendo y nadando durante horas y mdash incluso en agua dulce.
  • Se originan en biotopos hipersalinos y, por lo tanto, rara vez son vectores de enfermedades que afectan a los peces.
  • Crecen rápidamente, multiplicando su peso 500 veces en tres o cuatro semanas y aumentando de tamaño de 450 micrones a 1,5 centímetros de largo.

Sin embargo, criar camarones en salmuera hasta la madurez en cantidades útiles no es una tarea fácil y puede esperar dedicarle tanto tiempo, si no más, como lo haría con la cría y el cuidado de peces bebé y, a menudo, con resultados menos de los esperados. . La siguiente cartilla está diseñada para ayudar a evitar la necesidad de cometer los errores más frecuentes y mdash más a menudo, los errores de exceso de existencias, sobrealimentación, subalimentación, aireación inadecuada, filtración insuficiente y suministro de alimentos inapropiados.

Dadas las innumerables formas de matar inadvertidamente a estas criaturas, incluso en un entorno cómodo y controlado, parece contradictorio, si no francamente desalentador para el acuarista, que un animal de pedigrí prehistórico pueda, en su entorno natural, dejarse alto y seco. en el verano, desecado durante meses bajo el sol ardiente, trasladado a la fuerza a un clima lejano en el intestino de un ave migrante, re-depositado en un lago hiper-salino desprovisto de vida y sometido a temperaturas bajo cero, solo para emerger de su cápsula para prosperar de nuevo e incluso propagarse.

Sin más cavilación, supongamos que hemos eclosionado con éxito los huevos y deseamos cultivar los camarones en salmuera. ¿No podemos, como preguntó nuestro bienintencionado Webmaster, simplemente enviarlos a una escuela de francés?

Tanque de cultivo

El tanque de cultivo puede ser tan simple como un balde de 5 galones o tan complicado como un tanque Kreisel de $ 500. Las consideraciones de diseño importantes, al elegir o construir un tanque de cultivo, son permitir el control de la temperatura, la aireación adecuada (para mantener los niveles de oxígeno disuelto y suspender las partículas de alimentos), la filtración de agua interna o externa y / o el reemplazo parcial de agua y la concentración y evacuación de detritos, mortandad y materia fecal (a través de desagües con malla o sifón). Los sistemas de cultivo son variados, desde sistemas por lotes o estáticos, hasta sofisticados tanques de flujo continuo para cultivos de alta densidad. Si la intención es simplemente observar una pequeña cantidad de camarones de salmuera, lo ideal es un acuario con un filtro de arena / lodo y uno o dos tubos verticales de transporte aéreo direccional.

Media

Para mejorar sus posibilidades de éxito, comience con densidades de ganado de 1000 animales por litro o menos.

¿Cómo se pueden contar 1.000 minúsculos camarones en salmuera? La forma más fácil de manejar los recuentos de artemia es tomar muestras de una población distribuida aleatoriamente extrayendo pequeñas alícuotas del total, contando y luego extrapolando. Supongamos que comenzamos con un gramo (aproximadamente 1/2 cucharadita) de un huevo con calidad de eclosión al 80%. Si, después de 24 horas de incubación, recuperamos la mayor parte de los camarones de salmuera recién nacidos, ¡tendríamos más de 200.000 camarones de salmuera bebé!

Para probar nuestra teoría del muestreo de alícuotas, transfiera todos los animales a una botella de un litro que contenga agua de mar limpia con aireación. La aireación mantendrá a los camarones de salmuera en suspensión y, por lo tanto, se distribuirán al azar por todo el cono o la botella. Con una pipeta de un mililitro, extraiga un mililitro de agua y, con él, aproximadamente 1/1000 de la población total (1 litro = 1000 mililitros). Si nuestra técnica de muestreo es adecuada (se recomiendan las réplicas), deberíamos tener alrededor de 200 animales en nuestra muestra alícuota. Si no se dispone de una pipeta, se puede utilizar un cuentagotas calibrado para extraer una muestra medida de la botella.

Nota: Si este proceso ya ha excedido su tolerancia al tedio, puede considerar detenerse aquí, enriquecer todos los camarones de salmuera recién cosechados contenidos en la botella de un litro con SELCO y alimentar a sus peces o caballitos de mar con los camarones de salmuera bebé fortificados. . Pero, si insiste en camarones en salmuera más grandes y más robustos, siga leyendo. ¡Solo recuerda & mdash que tuviste tu oportunidad!

El rango de salinidad preferido para el cultivo de camarones en salmuera es 35-40 ppt (gravedad específica 1.024-1.028). A diferencia de la preparación de soluciones para incubar, donde las marcas caseras de sal para hornear, sal kosher y sal solar son adecuadas, el agua de cultivo debe mezclarse previamente con una sal marina apta para acuarios. Recuerde mezclar previamente y almacenar agua adicional para usarla más tarde. ¡Lo necesitarás!

El pH inicial debe estar entre 7.5 y 8. Es probable que el pH disminuya durante el período de cultivo y se puede ajustar hacia arriba con la adición de bicarbonato de sodio o NaHCO3. Monitoree el pH con regularidad y ajústelo según sea necesario.

La artemia es generalmente tolerante a niveles bajos de oxígeno disuelto. El estrés por oxígeno suele estar indicado por un enrojecimiento de los animales causado por el aumento de la presencia de heligmoglobina. Proporcionar una aireación adecuada para mantener los alimentos en suspensión generalmente elimina cualquier problema de OD (oxígeno disuelto). Tenga en cuenta que las burbujas pequeñas son vehículos más eficientes para la transferencia de oxígeno, pero que las burbujas muy finas ensucian los apéndices de natación e interfieren con la alimentación. Si el nivel de OD cae por debajo de 2.5 mg / l-1, agregue piedras de aire adicionales.

La temperatura debe mantenerse entre 20 ° Celsius y 25 ° Celsius (68 ° F-79 ° F). Recuerde que el agua de reemplazo debe tener una temperatura similar para evitar un choque térmico.

Alimentación

Las artemias son alimentadores de filtración continuos y no selectivos.2 El desafío más difícil en el cultivo de artemia es proporcionar alimento del tamaño apropiado en concentraciones suficientes sin comprometer indebidamente la calidad del agua. Afortunadamente, hay una serie de alimentos que se obtienen fácilmente y que son óptimos tanto en términos de tamaño (menos de 20 micrones) como de contenido nutricional.

El diseño y la aireación del tanque juegan un papel importante en la distribución del alimento a lo largo de la columna de agua. El alimento debe mantenerse en suspensión para poder ser utilizado. Esto se logra mediante el uso de puentes aéreos direccionales, piedras de aire y flujos de agua de retorno. Cuando se utilizan alimentos secos, se logra una mejor suspensión de los alimentos mezclando previamente el alimento con agua de mar limpia.

Deben controlarse los niveles de nitrógeno. Los niveles de NO2-N deben mantenerse por debajo de 320 mg / l-1.3 La calidad del agua se controla mediante una combinación de filtración mecánica, ya sea externa o interna, yo dilución con agua nueva y limpia.

Para mantener una calidad adecuada del agua, los sólidos en suspensión, los alimentos no consumidos, la materia fecal y los detritos deben eliminarse con regularidad. Esto presenta el enigma: ¿Cómo se pueden eliminar de manera eficiente estos contaminantes sin eliminar también los alimentos? Desafortunadamente, no hay una respuesta fácil. Los enfoques descritos en la literatura son más arte que ciencia, o se pasan por alto por completo. Ciertas pérdidas en la densidad de los alimentos debido a la filtración son inevitables. Los compromisos a menudo implican filtrar solo las parvadas grandes (permitiendo que los alimentos y los sólidos en suspensión pasen), permitiendo que las parvadas se asienten o concentren cerca de los desagües de efluentes antes de retirarlas, usando tiempos de retención de agua más largos y / o alternando entre ciclos intermitentes de filtración y alimentación.

A medida que los animales crecen, se pueden utilizar filtros con tamaños de malla más grandes. Un filtro típico al principio tendrá aberturas de 100 micrones. Estas aberturas se pueden aumentar a 350 micrones cuando los animales tienen aproximadamente dos semanas de edad. Los filtros deben limpiarse con regularidad. La colocación de piedras de aire delante de los filtros de efluentes ayudará a evitar el cegamiento del filtro. Obviamente, el aumento de las tasas de intercambio de agua y el aumento de los tamaños de las aberturas del filtro necesitarán un aumento proporcional en las tasas de alimentación para mantener las densidades de células alimentarias deseadas.

La densidad del cultivo, la densidad de las células alimentarias y la salud animal se pueden verificar retirando y examinando rutinariamente un vaso de precipitados con agua y manteniéndolo contra la luz para una inspección más cercana. Es posible notar la plenitud del intestino y determinar si los animales están adecuadamente alimentados. La densidad de las células alimentarias también se puede medir insertando un disco Secchi en el agua del tanque para medir la claridad. Se observa y registra la profundidad a la que el disco de Secchi se sumerge en el agua antes de oscurecerse. Las tasas de alimentación y las tasas de cambio se mantienen a un nivel que funciona para su sistema en particular.

El alimento preferido para la artemia son las diatomeas vivas cultivadas. Varias especies se han utilizado con éxito, incluidas Nanocloropsis sp., Tetraselmis sp., y Dunaliella sp. Proporcionar diatomeas vivas, por supuesto, implica un esfuerzo duplicado acorde con la cantidad de artemia que se debe alimentar. Como se mencionó anteriormente, los camarones de salmuera se alimentan continuamente y, en altas densidades, limpian rápidamente el agua de las diatomeas. La confianza en cultivos de diatomeas vivas, aunque es factible, debe hacerse con piensos sustitutos congelados o secos al alcance de la mano en caso de que los cultivos de algas se colapsen.

Una de las mejores opciones en alimentos fácilmente disponibles que hemos encontrado para el cultivo de artemia son las pastas de algas crioconservadas, particularmente Nanocloropsis sp. o la mezcla patentada, Tahitian Blend, que contiene varias especies de algas y vitamina C estabilizada. Estas pastas son células de algas no viables y altamente concentradas que se pueden administrar al tanque de cultivo gota a gota. El uso de pastas criogénicas de densidad celular conocida puede permitir al cultivador armonizar rápidamente los niveles de alimentación con la densidad y el crecimiento de la población de artemia.

Otros alimentos que se han utilizado con éxito para cultivar artemia son las levaduras unicelulares secadas por aspersión, sobre todo Torula. Otros alimentos que se han utilizado para cultivar camarones en salmuera son las formas micronizadas de salvado de arroz, salvado de maíz y soja.4 Estos alimentos se utilizan a menudo en combinación con otros enfoques. El tamaño adecuado de las partículas se puede lograr micronizando (usando una licuadora eléctrica) salvados con agua de mar y filtrando a través de una bolsa de malla 250 o más fina. Rocío seco Arthrospira platensis (antes Espirulina platensis) también se ha utilizado para sustentar camarones en salmuera. Se deben evitar los alimentos que lixivian fácilmente los nutrientes en el agua, ya que contribuirán a una alta carga bacteriana, una mayor demanda de oxígeno y el ensuciamiento de los apéndices de natación.

General

Como se mencionó anteriormente, existen muchos y variados sistemas que se han diseñado para el engorde del camarón de salmuera. Para cultivos de alta densidad (más de 10,000 animales por litro), la supervivencia requiere una filtración mecánica robusta e intercambio de agua y, en efecto, un sistema de canalización con tratamiento auxiliar y equipo de filtración. Los sistemas de "lotes" de menor densidad (1000 animales / lt.) Se basan en una combinación de intercambio regular de agua o dilución con agua de mar limpia y eliminación regular de detritos. En el sistema por lotes, las tasas de alimentación se reducen para compensar los tiempos de retención de agua más prolongados, lo que a menudo resulta en un crecimiento más lento. En cualquier sistema, la calidad del agua se mejora con la adición de un skimmer de proteínas.

Enfermedad

No es infrecuente que los filamentosos Leucothrix bacterias que emergen en el entorno de cultivo rico en proteínas. Vibrio sp. Pueden presentarse bacterias y otras enfermedades infecciosas. Estos brotes pueden tratarse con antibióticos y / o controlarse aumentando la salinidad. Es importante utilizar quistes desinfectados y desinfectar de forma rutinaria los aparatos de cultivo con una solución de hipoclorito.

Como se sugirió anteriormente, producir artemia adulta viva en cantidades suficientes para alimentar a numerosos tanques de peces o corrales de caballitos de mar requiere un trabajo considerable. Las demandas de la alimentación de artemia y la limpieza de filtros no cesan las 24 horas del día, los 7 días de la semana. Por otro lado, el cultivo de artemia de baja densidad es gratificante y menos difícil. Nuestro mejor consejo es comenzar poco a poco y escalar gradualmente.

Referencias

1Manual de producción y uso de alimentos vivos para la acuicultura. Documento técnico de pesca de la FAO 361, Lavens, P y Sorgeloos, P. 1996, pág. 168.


Evaluación de riesgos

La microbiología escolar generalmente será segura, pero antes de emprender cualquier actividad práctica, se deben evaluar los riesgos.

Cada individuo (estudiantes, técnicos o profesores) que se embarque en una actividad práctica es responsable de su salud y seguridad y de las demás personas afectadas por el trabajo.

La evaluación de riesgos implicará comparar los pasos involucrados en una actividad prevista con los procedimientos sugeridos en las evaluaciones de riesgos del modelo. Esto identificará las precauciones de seguridad que deben tomarse en el contexto del nivel de trabajo y, posiblemente, la necesidad de modificar el procedimiento para minimizar los riesgos para la salud y la seguridad derivados de cualquier peligro.

También deben cumplirse las normas locales. Lo más importante en la evaluación de riesgos es la consideración de las habilidades y el comportamiento de los estudiantes que están a punto de abordar una actividad práctica, un procedimiento que es seguro para un grupo de personas puede necesitar ser modificado con una clase diferente.

También es importante garantizar que un procedimiento sea seguro para los alumnos, pero que tampoco ponga en peligro la salud y la seguridad de los técnicos o profesores durante su preparación o eliminación. Al decidir las precauciones apropiadas a adoptar, es prudente que todos los cultivos sean tratados como potencialmente patógenos (por ejemplo, debido a una posible contaminación).

También se deben considerar los procedimientos de emergencia, como hacer frente a los derrames.


Vacunas contra la influenza a base de células

La producción de vacunas contra la influenza a base de células no requiere huevos de gallina porque los virus de la vacuna que se utilizan para fabricar la vacuna se cultivan en células animales.

¿Qué son las vacunas contra la influenza a base de células?

& lsquoCell-based & rsquo se refiere a cómo se fabrica la vacuna contra la influenza (gripe). La mayoría de las vacunas antigripales inactivadas se producen al hacer crecer los virus de la gripe en los huevos. Los virus de la gripe utilizados en las vacunas a base de células se cultivan en células cultivadas de origen mamífero en lugar de en huevos de gallina.

Flucelvax Quadrivalent es la única vacuna antigripal inactivada a base de células que ha sido autorizada por la FDA para su uso en los Estados Unidos.

¿Quién puede recibir Flucelvax Quadrivalent?

Flucelvax Quadrivalent está autorizado para su uso en personas de 4 años en adelante.

¿Por qué se ha desarrollado una vacuna contra la influenza a base de células?

Cell-based flu vaccine production does not use flu viruses grown in eggs and, therefore, is not dependent on the supply of eggs. In addition, cell-based flu vaccines that use cell-based candidate vaccine viruses (CVVs) have the potential to offer better protection than traditional, egg-based flu vaccines. The viruses used to make cell-based vaccines may be more similar to circulating &ldquowild&rdquo flu viruses than the viruses used to make egg-based vaccines. In one study published in the Journal of Infectious Diseases external icon among Medicare beneficiaries 65 years and older, cell-based vaccine provided greater protection against flu-related hospitalizations than standard-dose, egg based vaccine.

For the 2020-2021 flu season, all four flu viruses used in the Flucelvax Quadrivalent are cell-derived, making the vaccine egg-free.

How is the cell-based vaccine manufacturing process different than the traditional egg-based manufacturing process?

The cell-based vaccine manufacturing process uses animal cells (Madin-Darby Canine Kidney, or MDCK cells) as a host for the growing flu viruses instead of fertilized chicken eggs. For the 2020-2021 season, the viruses provided to the manufacturer to be grown in cell culture are cell-derived rather than egg-derived. Learn more about the cell-based flu vaccine manufacturing process on CDC&rsquos How Flu Vaccines are Made web page.

What is the significance of FDA approving cell-based candidate vaccine viruses for use in the Flucelvax Quadrivalent cell-based flu vaccines?

Growing flu viruses in eggs can introduce changes (called egg-adapted changes) that can cause differences between the viruses in the vaccine and the ones that are circulating. These changes may have important implications for the body&rsquos immune response to vaccination. For example, egg-adapted changes could cause the body&rsquos immune system to produce antibodies that are less effective at preventing disease caused by the specific flu viruses in circulation. FDA&rsquos approval of cell-based CVVs for use in cell-based flu vaccines could possibly improve the effectiveness of cell-based flu vaccines.

What are the possible benefits of using cell-based flu vaccines?

Observational studies have shown greater protection against flu or flu-like illness among people who received Flucelvax compared to those who received standard-dose egg-based vaccines.

A potential advantage of cell culture technology is that it might permit faster start-up of the vaccine manufacturing process in the event of a pandemic. The cells used to manufacture Flucelvax Quadrivalent are kept frozen and &ldquobanked.&rdquo Cell banking ensures an adequate supply of cells is readily available for vaccine production. Growing the flu viruses in cell culture for the manufacture of Flucelvax Quadrivalent is not dependent on an egg supply. Cell-based flu vaccines that are produced using CVVs have the potential to be more effective than traditional egg-based flu vaccines.

What were the results of the clinical trials using cell-based technology?

A clinical trial of the previous trivalent formulation of Flucelvax demonstrated effectiveness and safety among persons 18 through 49 years old. In immunogenicity studies among people 18 years and older and 4 through 17 years old, Flucelvax Quadrivalent was found to produce a similar immune response to the trivalent formulation. Post-vaccination symptoms were typical of those seen with other injectable flu vaccines.

Has cell-based technology been used before?

Cell culture technology has been used to produce other U.S.-licensed vaccines, including vaccines for rotavirus, polio, smallpox, hepatitis, rubella and chickenpox.

Cell-based flu vaccines have been approved for use in many European countries.


Why use Drosophila?

Teachers should use fruit flies for high school genetic studies for several reasons:
1. They are small and easily handled.
2. They can be easily anesthetized and manipulated individually with unsophisticated equipment.
3. They are sexually dimorphic (males and females are different), making it is quite easy to differentiate the sexes.
4. Virgins fruit flies are physically distinctive from mature adults, making it easy to obtain virgin males and females for genetic crosses.
5. Flies have a short generation time (10-12 days) and do well at room temperature.
6. The care and culture of fruit flies requires little equipment, is low in cost and uses little space even for large cultures.

By using Drosophila, students will:
1. Understand Mendelian genetics and inheritance of traits
2. Draw conclusions of heredity patterns from data obtained
3. Construct traps to catch wild populations of D. melanogaster
4. Gain an understanding of the life cycle of D. melanogaster, an insect which exhibits complete metamorphosis
5. Construct crosses of caught and known wild- type and mutated flies
6. Learn techniques to manipulate flies, sex them, and keep concise journal notes
7. Learn culturing techniques to keep the flies healthy
8. Realize many science experiments cannot be conducted and concluded within one or two lab sessions

National standards covered in these lessons:
Contenido:
1. Organisms require a set of instructions for specifying traits (heredity)
2. Hereditary information is located in genes.
3. Combinations of traits can describe the characteristics of an organism.

Students goals:
1. Identify questions and concepts that guide scientific investigations
2. Design and conduct scientific investigations
3. Formulate and revise scientific explanations and models using logic and evidence
4. Communicate and defend a scientific argument

The genetics of Drosophila are well documented and several public-domain web sites feature the complete annotated genome. Therefore, those teachers or students wishing to see where their mutations occur have a ready reference available.

Since Drosophila has been so widely used in genetics, there are many different types of mutations available for purchase. In addition, the attentive student may find mutations within their own wild-caught cultures since, due to a short generation time, mutations are relatively common compared to other animal species.


Clasificación
Domain: Eukarya
Reino Animal
Phylum: Arthropoda
Class: Insecta
Order: Diptera
Family: Drosophilidae
Genus: Drosophila (“dew lover”)
Species: melanogaster (“dark gut”)


Ciclo de vida de Drosophila melanogaster
Drosophila melanogaster exhibits complete metamorphism, meaning the life cycle includes an egg, larval (worm-like) form, pupa and finally emergence (eclosure) as a flying adult. This is the same as the well-known metamorphosis of butterflies. The larval stage has three instars, or molts.


Day 0: Female lays eggs
Day 1: Eggs hatch
Day 2: First instar (one day in length)
Day 3: Second instar (one day in length)
Day 5: Third and final instar (two days in length)
Day 7: Larvae begin roaming stage. Pupariation (pupal formation) occurs 120 hours after egg laying
Day 11-12: Eclosion (adults emerge from the pupa case).

• The generation time of Drosophila melanogaster varies with temperature. The above cycle is for a temperature of about 22°C (72°F). Flies raised at lower temperature (to 18°C, or 64°F) will take about twice as long to develop.
• Females can lay up to 100 eggs/day.
• Virgin females are able to lay eggs however they will be sterile and few in number.

After the eggs hatch, small larvae should be visible in the growing medium. If your media is white, look for the small black area (the mouth hooks) at the head of the larvae. Some dried premixed media is blue to help identify larvae however this is not a necessity and with a little patience and practice, larvae are easily seen. In addition, as the larvae feed they disrupt the smooth surface of the media and so by looking only at the surface one can tell if larvae are present. However, it is always a good idea to double check using a stereo microscope. After the third instar, larvae will begin to migrate up the culture vial in order to pupate.


Trabajo práctico para aprender

Incubating the plates to promote growth of microbios is an essential part of any microbiología investigación. Incubating in aerobio conditions, and below human body temperature, reduce the risk of encouraging microorganismos (particularly bacterias) that could be pathogenic a humanos. Taping the lids on reduces the chance that students will open plates when viewing, but there are details below of how to kill plates completely if this is still a significant risk.

Notas técnicas y de seguridad y salud

Carry out a full risk assessment before starting any microbiology work (see note 1 for more details).

1 Before embarking on any practical microbiological investigation carry out a full risk assessment. For detailed safety information on the use of microorganisms in schools and colleges, refer to Basic Practical Microbiology – A Manual (BPM) which is available, free, from the Society for General Microbiology (email This email address is being protected from spambots. You need JavaScript enabled to view it. ) or go to the safety area of the SGM website (www.microbiologyonline.org.uk/safety.html) or refer to the CLEAPSS Laboratory Handbook, section 15.2.

2 Keep plates at room temperature or incubate at 20-25 °C for 2-3 days. Fungi grow more successfully at lower temperatures. Do not incubate at human body temperature (or above 30 °C) – this reduces the risk of culturing microbes that are pathogens to humans.

3 Reducing the temperature to 4 °C will slow the growth of any cultures – so you can show your students a 2-3 day growth if your lessons are a week apart.

4 All inoculated plates must be taped before incubation to ensure they cannot be opened accidentally. Do this by fixing with 2 or 4 short strips of adhesive tape at opposite edges of the dish. Do not seal completely as this may promote the growth of anaerobic pathogens or prevent normal growth by restricting diffusion of oxygen. See CLEAPSS Laboratory Handbook 15.2.10.

5 Plates are incubated upside down (agar up), so that condensation does not drip onto the plate and interfere with the developing microbes.

6 You might replace lids if condensation makes viewing difficult, so label plates on the bottom – with Chinagraph or wax pencils, permanent marker pens or a small adhesive label at one edge.

7 Count the plates out and in again to ensure that you have collected all the plates at the end of a lesson.

8 You can seal plates around the whole circumference just before viewing if you think there is any risk that your students will open the plates. Or you can stop the growth of a culture completely by placing a piece of filter paper into the lid of the inverted plate. Add a little 40% methanal solution carefully to soak the filter paper and replace the base. Leave for 24 hours. Remove the filter paper, remove any surplus liquid, and reseal the plate. See CLEAPSS Laboratory Handbook section 15.2.11. On Hazcard 063, methanal is described as toxic at this concentration and a category 3 carcinogen.

Enlaces web

www.microbiologyonline.org.uk/sgmprac.htm
Society for General Microbiology – source of Basic Practical Microbiology, an excellent manual of laboratory techniques and Practical Microbiology for Secondary Schools, a selection of tried and tested practicals using microorganisms.

www.microbiologyonline.org.uk
MiSAC (Comité Asesor de Microbiología en las Escuelas) cuenta con el apoyo de la Sociedad de Microbiología General (ver más arriba) y sus sitios web incluyen más información de seguridad y un enlace para solicitar asesoramiento por correo electrónico.

(Sitios web consultados en octubre de 2011)

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Ver el vídeo: TUTORIAL CÓMO FUNCIONA UNA INCUBADORA DE LABORATORIO? (Enero 2022).